Pencernaan DNA Cepat 5-15Min Enzyme BsaI Biochemical Reagent CE Disetujui

Enzim BsaI

enzim adalah serangkaian enzim restriksi yang direkayasa untuk pencernaan DNA yang cepat dalam 5-15 menit.enzim dapat digunakan untuk mencerna plasmid, DNA genomik dan virus serta produk PCR.Semua enzim menunjukkan aktivitas yang unggul dalam buffer universal, sehingga menyederhanakan sistem reaksi pencernaan enzimatik.Selain itu, enzim memberikan redundansi enzim yang sangat baik, memungkinkan pencernaan kelebihan substrat atau cetakan yang sulit dengan mudah.

Pengiriman dan Penyimpanan

Komponen dikirim dengan paket es dan dapat disimpan pada suhu -20°C selama 2 tahun.

Situs Pemotongan

5'-GGTCTC(N)1-3'

3'-CCAGAG(N)5-5'

Kondisi Reaksi yang Direkomendasikan

1× Penyangga FuniCut™;Inkubasi pada suhu 37℃.

Inaktivasi Termal

Inkubasi pada 80℃ selama 20 menit.

Kontrol kualitas

1. Definisi aktivitas:1 g pPIC9K DNA sepenuhnya dicerna dengan 1 L enzim dalam 15 menit pada 37℃ dalam total volume reaksi 20 L.

2. Inkubasi Berkepanjangan / Uji Aktivitas Bintang:Tidak ada degradasi yang terdeteksi dari 1 g pPIC9K DNA karena kontaminasi nuklease atau aktivitas bintang terjadi selama inkubasi dengan 1 L FuniCut™ BsaI selama 3 jam pada suhu 37℃.Inkubasi yang lebih lama dapat menyebabkan aktivitas bintang.

3. Uji Ligasi dan Recleavage (L/R):Setelah dicerna dengan enzim 1μL dalam kondisi optimal, produk daur ulang dari pencernaan dapat diligasi di bawah T4 DNA Ligase pada 22℃.Produk ligasi dapat ditarik kembali oleh enzim.

4. Aktivitas Endonuklease Nonspesifik:Inkubasi 1 L enzim dengan 1 g supercoiled plasmid DNA selama 4 jam pada suhu 37℃ tidak menghasilkan perubahan kondisi supercoiled.

instruksi

1. Protokol untuk Pencernaan Cepat dari DNA yang berbeda

1.1 Gabungkan komponen reaksi berikut di atas es dalam urutan yang ditunjukkan:

[Catatan]: *Untuk produk PCR murni.Jumlah 10×Penyangga FuniCut™dapat dikurangi menjadi 2 L karena kekuatan ion yang tersisa dalam produk PCR yang tidak dimurnikan.Produk PCR direkomendasikan untuk dimurnikan terlebih dahulu sebelum didestruksi Saat Produk PCR akan digunakan untuk kloning.

1.2 Aduk perlahan (jangan divortex) dan putar ke bawah.

1.3 Inkubasi pada suhu 37℃ selama 15 menit (DNA plasmid) atau selama 15-30 menit (produk PCR) atau selama 30-60 menit (DNA genom).

1.4 Opsional: Nonaktifkan enzim dengan memanaskan selama 20 menit pada 80℃.

2. Pencernaan Ganda dan Ganda dari DNA

2.1 Gunakan 1 L setiap enzim dan tingkatkan kondisi reaksi dengan tepat.

2.2 Volume gabungan enzim dalam campuran reaksi tidak boleh melebihi 1/10 dari total volume reaksi.

2.3 Jika enzim memerlukan suhu reaksi yang berbeda, mulailah dengan enzim yang membutuhkan suhu lebih rendah, kemudian tambahkan enzim kedua dan inkubasi pada suhu yang lebih tinggi.

3. Meningkatkan Reaksi Pencernaan DNA Plasmid

[Catatan]: Inkubasi dalam termostat air, termostat logam atau termostat pasir.Tingkatkan waktu inkubasi jika total volume reaksi melebihi 20 L.

Jumlah Situs Pengakuan dalam DNA