2× Universal Blue GSK Green QPCR Master Mix Dengan 40× Yellow Template Dilution Buffer

2×Universal Blue GSK Green qPCR Master Mix Dengan 40×Yellow Template Dilution Buffer

Pengenalan 2×Universal Blue GSK Green qPCR Master Mix:

Produk ini merupakan larutan premix 2x untuk qPCR menggunakan metode fluoresensi chimeric GSK Green I.Komponen inti, Taq DNA Polymerase, adalah DNA Polymerase yang diaktifkan panas yang diblokir dengan metode antibodi, yang secara efektif dapat menghambat amplifikasi nonspesifik dalam kondisi suhu rendah.Sementara itu, dikombinasikan dengan Buffer reaksi yang dioptimalkan untuk qPCR, Taq DNA Polymerase sangat cocok untuk reaksi qPCR dengan spesifisitas dan sensitivitas tinggi.Kurva standar yang baik dapat diperoleh di area kuantitatif yang luas, yang akurat, dapat direproduksi dan dapat diandalkan untuk analisis kuantitatif gen target.Pada saat yang sama, produk ini mengandung Pewarna Referensi Pasif ROX khusus yang cocok untuk digunakan di semua instrumen qPCR, dan tidak perlu menyesuaikan konsentrasi ROX pada instrumen yang berbeda.Pewarna biru ditambahkan dalam premix, yang memiliki efek pelacak menambahkan sampel, dan pengencer template kuning disediakan pada waktu yang sama.Ketika template diencerkan dengan pengencer template kuning dan ditambahkan ke dalam premiks reaksi biru, warna berubah dari biru menjadi hijau, yang dapat memainkan peran pelacak dalam persiapan proses sistem reaksi dan mencegah kebocoran atau kesalahan penambahan.Spektrum pewarna biru dan kuning tidak tumpang tindih dengan pewarna qPCR dan tidak mempengaruhi hasil reaksi.

Informasi Produk 2×Universal Blue GSK Green qPCR Master Mix :

Kondisi Penyimpanan dan Penanganan dengan 2×Universal Blue Green qPCR Master Mix Dengan 40×Yellow Template Dilution Buffer:

Transportasi kantong es basah;Disimpan pada suhu -20℃, berlaku selama 12 bulan.

Protokol / Prosedur Pengujian:

1. (Opsional) pengenceran template 2xUniversal Blue GSK Green qPCR Master Mix​:

Kit ini menyediakan 40x YELLOW Template Dilution Buffer, 40 kali diencerkan Yellow Template Dilution yang dapat digunakan untuk menentukan secara akurat apakah Template telah ditambahkan ke cairan reaksi qPCR dengan mengubah warna cairan.Mengambil sistem reaksi qPCR 20ul sebagai contoh, sesuai dengan jumlah template pengenceran yang ditambahkan ke dalam larutan reaksi qPCR 20ul, metode pengenceran yang sesuai dari template asli dapat dirujuk ke tabel berikut (mengambil template asli yang diencerkan hingga 100ul sebagai contoh ):

Contoh:

Template encer 2ul harus ditambahkan ke sistem reaksi qPCR 20ul.

Mengambil sistem 100ul Template Dilution sebagai contoh, ketika volume Template asli adalah 20ul, 25ul 40x Yellow Template Dilution Buffer ditambahkan, dan kemudian Air bebas Nukleus 55ul ditambahkan ke total volume 100ul.

BUFFER PENGENCAN TEMPLATE KUNING 40x sekarang menjadi 10x.Tambahkan 2ul Template yang diencerkan ke dalam Penyangga Pengenceran 20ul, dan Penyangga Pengenceran Template KUNING 40× terakhir adalah 1x.Kesimpulannya, Yellow Template Dilution Buffer harus 1x dalam sistem qPCR akhir.

Catatan:Jika template tidak perlu diencerkan, atau jika pengencer template G3362-2 tidak digunakan, Anda dapat mengabaikan langkah ini.

2. Merekomendasikan sistem reaksi qPCR tentang 2×Universal Blue GSK Green qPCR Master Mix​::

sebuah.Biasanya, efek amplifikasi yang baik dapat diperoleh dengan konsentrasi akhir 0,2um.Ketika kinerja reaksi buruk, konsentrasi primer dapat disesuaikan dalam kisaran 0,2-1,0um.

b.Jumlah penambahan template bervariasi dengan jumlah salinan gen target dalam larutan template, dan jumlah penambahan template yang sesuai dibahas dengan pengenceran gradien.Jumlah penambahan DNA template terbaik dalam sistem reaksi 20ul adalah kurang dari 100 ng.Ketika cDNA (larutan reaksi RT) dari reaksi RT-PCR digunakan sebagai cetakan, jumlah penambahan tidak boleh melebihi 10% dari total volume larutan reaksi PCR.

3. Prosedur reaksi PCR (dapat disesuaikan dengan instrumen) :

a: Jika spesifisitas amplifikasi perlu ditingkatkan, prosedur dua langkah atau suhu anil dapat digunakan;Untuk meningkatkan efisiensi amplifikasi, prosedur tiga langkah atau waktu perpanjangan dapat digunakan.

Catatan:

1. Harap kenakan sarung tangan sekali pakai selama operasi untuk menghindari kontaminasi RNase.

2. Produk transkripsi terbalik dapat disimpan pada -20℃ untuk waktu yang singkat.Jika penyimpanan jangka panjang diperlukan, disarankan untuk menyimpannya pada suhu -80℃ setelah pengemasan untuk menghindari siklus beku-cair berulang.

3. Jika template berasal dari eukariotik, direkomendasikan untuk memilih Oligo (dT)18 Primer dan memasangkannya dengan 3' Poly A tail mRNA eukariotik untuk mendapatkan hasil cDNA full-length tertinggi.

4. Untuk transkripsi balik RNA prokariotik, sebaiknya digunakan Random Hexamer Primer atau Gene Specific Primer.

5. Random Hexamer Primer memiliki penerapan yang luas dan cocok untuk mRNA, rRNA, tRNA, RNA kecil dan lncRNA template.

6. Jika transkripsi terbalik diikuti oleh uji qPCR, Oligo (dT)18 Primer dan Random Hexamer Primer dapat dicampur untuk membuat efisiensi sintesis cDNA di semua wilayah mRNA sama, yang membantu meningkatkan keaslian dan pengulangan hasil kuantitatif.

7. Jika primer qPCR berikutnya dirancang melintasi ekson, langkah penghapusan genom dapat dihilangkan.

Prinsip desain primer:

1. Panjang produk amplifikasi direkomendasikan antara 80-300 bp;

2. Panjang primer: 18-25 bp;

3. Kandungan basa G+C dalam primer harus antara 40%-60%;

4. Perbedaan nilai Tm antara primer maju dan primer mundur kurang dari 2℃, dan nilai Tm antara 58-62℃ adalah yang terbaik;

5. Keacakan distribusi basis;

6. Primer sebaiknya tidak mengandung urutan pelengkap sendiri, jika tidak mereka akan membentuk struktur jepit rambut sekunder;

7. Tidak boleh ada lebih dari 4 basa komplementer atau homolog antara dua primer, jika tidak akan terbentuk dimer primer, terutama tumpang tindih komplementer pada ujung 3';

8. Basis terminal 3' dari primer disarankan sebagai G atau C;

9. Tidak ada produk non-spesifik lainnya yang ditemukan dalam hasil perbandingan NCBI.

Masalah umum dan solusi:

Jika Anda memerlukan info lebih lanjut tentang 2xUniversal Blue GSK Green qPCR Master Mix Dengan 40xYellow Template Dilution Buffer, beri tahu kami secara online, terima kasih.